MonScript? RTIII All-in-One Mix with dsDNase是針對一鏈cDNA合成開發出的一個操作更為簡便的系統,包含所有一鏈cDNA合成反應所需組分(MonScript? RTase III及其反應Buffer、RNA酶抑制劑、dNTPs, Oligo(dT)20VN和隨機引物等),反應中僅需加入RNA模板和水。預混液中的 MonScript? RTIII(REF: MR00201)是基于M-MLV RTase開發的第三代逆轉錄酶,該酶去除了RNase H活性,反應溫度高達55℃,大幅提升了逆轉錄效率和對復雜模板(高GC比例或大量二級結構)的耐受性,特異性更好、產率更高、更容易獲得全長cDNA。使用該逆轉錄預混液15分鐘內最長可獲得12 kb大小的cDNA,獲得的cDNA下游推薦用于qPCR。
該預混液采用高效的dsDNase,該酶具有熱敏感性,可在高溫條件下快速不可逆地失活,因此僅需一次加樣,即可同管進行去除基因組DNA污染與逆轉錄反應,與使用 DNase I去除基因組DNA污染相比,無需額外加入EDTA進行失活,不僅減少了對RNA模板的損傷、降低RNase污染風險,而且節省實驗時間。