MonScript? RTIII All-in-One Mix是針對(duì)一鏈cDNA合成開(kāi)發(fā)出的一個(gè)操作更為簡(jiǎn)便的系統(tǒng),包含所有一鏈cDNA合成反應(yīng)所需組分(MonScript? RTase III及其反應(yīng)Buffer、RNA酶抑制劑、dNTPs, Oligo(dT)20VN和隨機(jī)引物等),反應(yīng)中僅需加入RNA模板和水。預(yù)混液中的 MonScript? RTIII(REF: MR00201)是基于M-MLV RTase開(kāi)發(fā)的第三代逆轉(zhuǎn)錄酶,該酶去除了RNase H活性,反應(yīng)溫度高達(dá)55℃,大幅提升了逆轉(zhuǎn)錄效率和對(duì)復(fù)雜模板(高GC比例或大量二級(jí)結(jié)構(gòu))的耐受性,特異性更好、產(chǎn)率更高、更容易獲得全長(zhǎng)cDNA。使用該逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混液15分鐘內(nèi)最長(zhǎng)可獲得12 kb大小的cDNA,獲得的cDNA下游推薦用于qPCR。 該預(yù)混液采用高效的dsDNase,該酶具有熱敏感性,可在高溫條件下快速不可逆地失活,因此僅需一次加樣,即可同管進(jìn)行去除基因組DNA污染與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),與使用 DNase I去除基因組DNA污染相比,無(wú)需額外加入EDTA進(jìn)行失活,不僅減少了對(duì)RNA模板的損傷、降低RNase污染風(fēng)險(xiǎn),而且節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。