MonClone? Fast T4 DNA Ligase由攜帶T4噬菌體gene 30的大腸桿菌產生。該酶催化雙螺旋DNA或RNA之間的5'-磷酸基團和3'-羥基之間形成磷酸二酯鍵。該酶在雙鏈DNA、RNA或者DNA/RNA復合物間可修復單鏈缺刻, 并且可以連接有粘性末端或者平末端的DNA片段，但對于單鏈核酸無活性，主要用于限制性內切酶酶切產物DNA片段克隆、基因定點突變與PCR產物克隆、修復雙鏈DNA缺刻與線性DNA自環化。Fast T4 DNA Ligase需要ATP作為輔助因子，在室溫下完成粘性末端連接反應僅需10分鐘。