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5'... C A G/C T G...3' 3'... G T C/G A C...5' 快速內切酶，可在5~15 min內完成反應 反應溫度為37℃ 受EcoBI甲基化影響，序列可能重疊，剪切可能受影響 不可熱失活 3 h溫育未表現星號活性，延時酶切可能出現星號活性